一例赛鸽感染鸽I型副粘病毒和鸽圆环病毒的诊断、分离鉴定与遗传进化分析

    在四川地区的一个赛鸽养殖棚里，出现了赛鸽生病的情况。研究人员针对这群生病的赛鸽，进行了一系列的检测和分析工作，包括实验室诊断、找出致病病原体并确定其特性，以及研究病毒的遗传进化关系。这些研究结果可以为养鸽人在疾病监测、给鸽子打疫苗和综合预防控制疾病方面提供有用的参考。

     一、研究的材料和方法

    用于研究的生病赛鸽来自四川的某鸽棚，它们大概60天大，出现了身体颤抖、走路不稳等不正常的症状。实验用的SPF种蛋是从北京的一家生物技术有限公司购买的，在武汉的一家生物股份有限公司孵化好后，用于后续的实验。

    在检测和实验操作上，研究人员合成了特殊的引物，用它来检测赛鸽病料样本里有没有禽流感病毒、鸽副粘病毒、鸽疱疹病毒、鸽圆环病毒、鸽腺病毒等这些常见的病毒。检测鸽子体内新城疫抗体的时候，严格按照国家标准GB/T 16550 - 2020来做。对于药敏试验，先把分离培养出来的细菌制成均匀的混悬液，涂在培养基的表面，再贴上药敏片，然后放在37℃的温箱里培养24小时。通过观察抑菌圈的大小，就能知道细菌对各种药物的耐药情况。要是样本检测出鸽副粘病毒是阳性，就把相关组织进行匀浆、离心、过滤处理，再把处理后的样本接种到10日龄的SPF鸡胚上。接种之后，在不同时间收集鸡胚的尿囊液，检测它的血凝价。

    另外，研究人员还设计了专门的引物，对病毒的基因进行扩增，再进行测序。把测序得到的结果用相关软件进行整理拼接，最后用专业软件分析这些序列，构建进化树，这样就能更深入地了解病毒的遗传进化关系。

    二、研究得出的结果

    赛鸽进入鸽棚后，按照特定的免疫流程打疫苗。先接种新城疫活苗（LaSota株），同时接种新城疫灭活苗，过15天之后，再给灭活苗打第二针。打完第二针疫苗后，对赛鸽群体进行新城疫抗体的抽样检测。结果显示，赛鸽群体的免疫效果不错，抗体水平比较整齐。这说明按照这个免疫流程给鸽子打疫苗，能让它们产生比较理想的免疫反应。可是，在打完第二针疫苗后的第7天，鸽棚里的赛鸽就出现问题了。生病的赛鸽一开始没什么食欲，精神也不好，还拉绿色的稀便。接着，就慢慢出现身体颤抖、痉挛、角弓反张等明显的神经症状，有些病得厉害的鸽子直接就倒地不起了。病情发展得很快，死亡率达30%。解剖病死的赛鸽后发现，它们的肝脏肿大还出血，腺胃乳头表面有好多点状出血，乳头的轮廓和界限都看不清楚了；气管环也出血，还伴有少量的粘液；脑部粘膜是弥漫性出血。经过检测，确定赛鸽感染了鸽Ⅰ型副粘病毒、鸽圆环病毒，同时还有大肠杆菌感染。这表明这次赛鸽生病是多种病原体一起感染造成的。

    药敏试验的结果显示，感染的细菌只对多粘菌素B敏感，对哌拉西林、头孢曲松、头孢噻肟、四环素、丁胺卡纳、大观霉素、氟苯尼考等很多常用的抗生素都耐药。这个结果对后面制定治疗方案很重要，意味着在治疗细菌感染的时候，选择抗生素要特别小心。

    在鸽Ⅰ型副粘病毒的分离和分析方面，把感染了鸽Ⅰ型副粘病毒的病料接种到鸡胚上，72小时内鸡胚就全部死亡了，而且鸡胚发育得不好，出血很严重。通过这个过程，成功分离出了一株病毒，给它取名叫KQ202403077。进一步实验发现，用打了两次LaSota疫苗的鸽血清，能部分中和KQ202403077的血凝活性。对KQ202403077的F基因深入分析后发现，它和LaSota疫苗株的核苷酸同源性比较低，但和国内其他分离出来的毒株同源性较高，属于基因Ⅵ型2.1.1.2.2分支。这个分支在国内赛鸽养殖中很常见，它的广泛存在一直威胁着赛鸽的健康。

    对鸽圆环病毒进行核酸扩增、测序和拼接后，得到了KQ202403075这个序列。分析发现，这个序列和国内一些分离株的Cap蛋白同源性比较高，属于A分支。这个结果让我们知道了这次感染的鸽圆环病毒和国内其他毒株在遗传进化上的关系，为进一步了解这种病毒的传播和变异规律提供了重要线索。

    三、研究的讨论和未来展望

    在这次研究中，赛鸽感染了鸽Ⅰ型副粘病毒、鸽圆环病毒，还继发了大肠杆菌感染，这给养殖户造成了很大的经济损失。鸽Ⅰ型副粘病毒是单链RNA病毒，它的抗原很容易发生变化，这就使得以LaSota为代表的基因IV型新城疫疫苗的免疫效果受到影响。同时，鸽圆环病毒感染会抑制鸽子的免疫系统，让赛鸽的免疫力下降，这样它们在面对其他病原体的时候就更容易被感染。

    对分离出来的PPMV - 1进一步研究发现，这个分离株属于我国现在流行最广的基因Ⅵ型分支，它是在最初的2.1.1分支内部演化出来的新分支。它和2.1.1.2.1分支曾经同时存在过一段时间，但最后2.1.1.2.2分支成了我国东部和南部地区的主要流行分支，和新城疫病毒的遗传距离比较远。赛鸽能长距离飞行，这让鸽Ⅰ型副粘病毒的基因变得更加多样和复杂，不仅危害赛鸽自身的健康，还对养殖行业有潜在的风险。鸽圆环病毒在鸽群里传播得很广泛，现在又没有有效的商品化疫苗。感染了鸽圆环病毒的赛鸽可能不会有明显的特殊症状，但会更容易感染其他疾病。

    这次研究鉴定出的鸽圆环病毒分离株属于A分支，和国内其他分离株的亲缘关系比较近，这说明鸽圆环病毒在国内的流行和传播已经进入了一个相对稳定的阶段。不过，为了更好地预防和控制这两种病毒，以后还需要深入研究它们的致病机制、遗传进化规律，这样才能制定出更有效的防控策略，保证养鸽业能够健康发展。